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2-25
通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的培養(yǎng)物稱為細胞株。細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。文獻定義由新鮮組織制成的細胞培養(yǎng)物稱原代細胞,這種細胞經(jīng)傳代成功后的細胞稱做細胞系,可泛指一般可能傳代的細胞,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系(所組成,這種細胞世系含有多種細胞類型。若用胰蛋白酶等將原代細胞消解分散后,再培養(yǎng)一代,稱次代培養(yǎng)。這個就是細胞株。
2-21
細胞株,對于不熟悉它的人來說沒什么,但了解它的人就知道它的作用。實驗中常用的一個細胞株,在生物制藥中使用也非常廣泛。細胞株培養(yǎng)條件簡單,貼壁強度適中,比較容易轉(zhuǎn)染,很適合用它來研究一般哺乳動物基因的功能。通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的培養(yǎng)物稱為細胞株(CellStrain),也就是說,細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。它的使用要格外小心,主要還是用于實驗室和生物學中。
2-19
PCR儀,中文是聚合酶鏈式反應(yīng),其實是一種DNA的快速擴增技術(shù),其擴增效率之高就象核裂變的“鏈式反應(yīng)”那樣。PCR技術(shù)有以下幾個特點:一是被擴增的DNA所需量極小,理論上講一個分子就可以用于擴增了;二是擴增效率高,目的基因的量成指數(shù)形式擴增,幾個小時就擴增1000萬倍以上?,F(xiàn)在PCR技術(shù)已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于生命科學研究、食品衛(wèi)生、醫(yī)療、法醫(yī)及環(huán)境監(jiān)測等諸多方面。
2-4
我們知道PCR儀有普通PCR儀和實時熒光定量PCR儀,還有種梯度PCR儀。梯度PCR儀把一次性PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件,溫度梯度,通常有12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因為被擴增的不同DNA片段,其zui適退火溫度事不同,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增,就可以篩選出表達量高的zui適退火溫度,進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間。主要用于科研,教學機構(gòu)。梯度PCR儀,在不...
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除了有普通的PCR儀外,還有種實時熒光定量PCR儀。在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴增原理和普通PCR儀擴增原理相同,只是PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng)得出量化的實時結(jié)果輸出。這個PCR儀叫做實時熒光定量PCR儀。熒光定量PCR儀有單通道,雙通道,和多通道。當只用一種熒光...
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PCR儀利用升溫使DNA變性,用限制性內(nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈,在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈,進而達到基因復制的目的。PCR儀可以分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實時熒光定量PCR儀等幾類。普通PCR儀一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的,對目的基因退火溫度的擴增。它主要應(yīng)用于科研、教學、臨床醫(yī)學、檢驗、檢疫等。
1-23
PCR儀是什么呢?它是聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù),指利用耐熱DNA聚合酶的反復作用,通過變形-延伸-復性的尋壞操作,在體外迅速將DNA模板擴增數(shù)百萬倍的一種操作技術(shù)。PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。目前常用的技術(shù),可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定量PCR儀四類。這就是PCR儀。
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