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細(xì)胞株的消化法傳代

更新時間:2013-03-25      點擊次數(shù):1885

  細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。

  貼壁細(xì)胞的消化法傳代:吸除瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。以50ml培養(yǎng)瓶為例,向瓶內(nèi)加入2-3ml胰蛋白酶,輕輕搖動培養(yǎng)瓶,使消化液流遍所有細(xì)胞表面。消化在37C或室溫25C以上環(huán)境下進(jìn)行。消化后把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進(jìn)行觀察.發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后。應(yīng)立即終止消比,然后吸掉消化液后再加全培養(yǎng)液終止消化。用彎頭吸管,吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液,反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞,吹打過程要順序進(jìn)行,從培養(yǎng)瓶底的一端開始到另一端結(jié)束,以保證所有的底部都被吹到。吹打動作要輕柔同時盡可能不要出現(xiàn)泡沫。這些都對細(xì)胞有損傷。細(xì)胞脫離瓶壁后形成細(xì)胞懸液。zui后,計數(shù)分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。部分貼壁生長細(xì)胞,不經(jīng)消化處理直接吹打也可使細(xì)胞從瓶壁脫落下來,而進(jìn)行傳代。但這種方法于部分貼壁不牢的細(xì)胞,如Hela、PC12細(xì)胞等。直接吹打?qū)?xì)胞損傷較大,細(xì)胞常也有較大數(shù)目的丟失,因而絕大部分貼壁生長的細(xì)胞均需消化后,才能吹打傳代。

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